磷酸化是細胞內最常見和最重要的蛋白質翻譯后修飾之一。蛋白質的磷酸化和去磷酸化作為一種“分子開關”,通過影響蛋白質的結構、定位和功能,在細胞的信號轉導、轉錄翻譯、代謝和發(fā)育等生命過程中發(fā)揮著重要作用。在真核細胞中,大約 1/3 的蛋白質會被磷酸化。
盡管磷酸化蛋白的數目相對較多,但磷酸化多肽在總酶切多肽中的占比并不高,據推測可能不足 5%,大量非磷酸化蛋白的存在會對磷酸化蛋白的鑒定造成一定的挑戰(zhàn)。近年來不斷有各種磷酸化富集方法的報道,使得磷酸化蛋白質和磷酸化位點的鑒定數目有了大幅度的提高,目前最常用的是親和色譜法,包括IMAC,Fe-NTA和TiO2等。
青蓮百奧推出了基于Ti-IMAC材料的磷酸化肽段富集試劑盒,利用金屬離子Ti與磷酸基團之間的特異性相互作用富集磷酸化肽段,富集能力是常規(guī)固定化金屬離子親和色譜法(Fe3+-IMAC)的3倍以上,與TiO2相比可以提高約30%,富集特異性可達95% [1]。
青蓮百奧磷酸化肽段富集試劑盒——PEB2
測試使用100ug Hela細胞肽段,在DIA的數據采集模式下使用QE-HFX進行質譜檢測,檢測梯度60min。最終檢測到24,000+磷酸化位點,22,000+磷酸化肽段和3,600+磷酸化蛋白。其中,多位點磷酸化蛋白數量占比近40%。
高效的富集能力:26000+位點
穩(wěn)定的富集能力:富集效率維持在90%以上
多位點磷酸化肽比例高
相比于常規(guī)的實驗流程,磷酸化肽段富集試劑盒PEB可以良好適配自動化流程。結合青蓮百奧最新發(fā)布的智慧實驗室——Magic Show,覆蓋從蛋白質提取、質量控制、低豐度富集、還原烷基化、酶解脫鹽到翻譯后修飾富集的樣本前處理全流程。實現磷酸化肽段的高效、自動化富集,進一步降低人為誤差,縮短實驗流程!
青蓮百奧修飾蛋白組學產品線升級,不僅精心打磨了經典修飾產品線(如磷酸化、糖基化、泛素化等),同時開拓了一系列新型修飾產品線(如乳酸化、酰化修飾、氧化還原等)。現憑借先進的高分辨率、高靈敏度質譜技術,積累了豐富的修飾組學研究經驗,提供深入的生物信息學分析報告,為科研工作的深入探索和成果的有效轉化提供強有力的支持。歡迎咨詢!
參考文獻:
Yao Y, Dong J, Dong M, et al. An immobilized titanium (IV) ion affinity chromatography adsorbent for solid phase extraction of phosphopeptides for phosphoproteome analysis. J Chromatogr A. 2017;1498:22-28. doi:10.1016/j.chroma.2017.03.026